超声波裂解仪在破碎大肠杆菌时的技巧 
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超声波裂解仪在破碎大肠杆菌时的技巧


破碎大肠杆菌用于提取表达外源蛋白,在使用超声波破碎仪之前;用含有1%triton -X-100的PBS悬浮,然后再破碎效果较好, 1%triton- X 100的作用还是很明显的,对其他的一些细菌同样起作用,比如链霉菌。
细菌沉淀直接加样品1buffer,再加5μ 1的巯基乙醇,混匀,离心,煮沸10min,直接上样,染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min就可以。在表达重组蛋白后用超声波破碎细胞,采用冰浴,400w, 破2s停1s,但是不一会就产生大量泡沫,影响了破碎功率,pbs 和tris缓冲液都是这样,最后都是破碎不完全,而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。
1*会产生气泡是因为你的探头位置没放好。超声波破碎仪探头一定要接近底部,约1cm (推荐是距底部0. 5mm)。功率根据仪器不同会有所不同,但你可以观察液面,有波动但不要太剧烈就好。
2*破3s停10s,破碎20-30个循环观察效果。
3*探头位置摆放也要注意,听声音如果不对的话就要及时调整。另外可以从菌浓度方面考虑。在使 用超声波破碎时试着加大体积,振幅最好不要超过60%.
4*尝试超8s停8s,对有些菌体蛋白来说,通常方法很难散热,导致蛋白变性产生气泡,最好停顿时间稍长一些, 这种情况多见于包涵体形式的蛋白。

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